1864年5月12日，丹麦同普奥两国缔结停战协定。此后双方进行谈判，于8月签订《加斯泰因协定》：石勒苏益格划给普鲁士，荷尔斯泰因划给奥地利。

武力与外交结合击败奥地利

《加斯泰因协定》实际上是俾斯麦设计的迷魂阵，因为奥地利管辖的荷尔斯泰因中间隔着普鲁士其他邦，这为普奥矛盾打下楔子，为俾斯麦提供了战争借口。

《加斯泰因协定》签订后，奥皇约瑟夫想用麻烦不断的荷尔斯泰因换取格拉茨省，被俾斯麦拒绝。于是双方在领土问题上摩擦不断，终于到了兵戎相见的地步。

俾斯麦准备对奥战争，最担心的是法国。1865年10月4日，法皇拿破仑三世会见俾斯麦。俾斯麦为换取法国中立，欢迎把卢森堡、瑞士法语区、莱茵河左岸的德国土地等并入法国领土。俾斯麦说：“一个怀有远大志向的普鲁士将把法国人的友谊看作是极端重要的。”拿破仑三世的策略是，等普奥两败俱伤后，他好乘机占领卢森堡、比利时和莱茵河左岸地区。

为了迫使奥地利两面作战，俾斯麦向意大利提出结成军事同盟，遭到法国反对。于是，俾斯麦再次面见拿破仑三世，对他说，普奥战争对普鲁士来说是长期而艰苦的，是消耗战，请拿破仑三世安心。

俾斯麦的战争政策遭到宫廷和许多民众的反对，但俾斯麦在御前会议上坚定地说：“人们常说，命运无常。我拿脑袋作赌注，哪怕我上断头台，也要赌到底。普鲁士和德意志都不能保持原状，两者都必须走（武力）这条路，别无他途！”

群众的反战情绪终于达到极点。5月7日，俾斯麦从王宫回家途中正行走在菩提树下街上。突然他听到身后两三声枪声。他急转身看到一个青年正向他射击！俾斯麦猛扑过去，一手抓住青年的右手腕，一手抓住青年的喉咙。刺客用左手拿过手枪，向俾斯麦开了两枪。一枪打在衣服上，一枪击中肋部。俾斯麦死死掐住青年的喉咙不放。这时一个行路人和两个士兵赶来，抓住刺客，俾斯麦安然脱险。

俾斯麦坚持走回官邸。夫人约翰娜正陪客人用餐。俾斯麦没有打搅他们，而是走进书房，给威廉一世写了一个简短的报告，然后走进餐厅，吻了夫人的前额，像讲故事似地说：“小宝贝，你不要害怕，一个人开枪打我，感谢上帝，我没有事！”

重重阻力都无法阻止俾斯麦统一德意志的决心。1866年6月16日，普鲁士军队正式对奥地利军队展开进攻。

战争开始后，俾斯麦神经紧张。他同英国大使在外交部花园里走来走去。他对英国大使说：“普鲁士可能被打败。如果我们被打败，我就不回来了。”随后，俾斯