对小鼠囊胚进行NgAgo、5’磷酸化ssDNA原核共注射之后获得囊胚,进行DNA提取、PCR扩增和测序之后的一个典型测序结果。
微注射NgAgo的小鼠受精卵凝胶电泳。
代表性的所有电泳胶的序列的Clustal比对。Ank-1作为参考序列。
一个代表性测序色谱图(使用反向引物测序)。
他表示:在多番尝试、试验3个不同的细胞后,没有发现严格意义上证明NgAgo发生基因编辑的证据;在他看来,NgAgo酶需要加热到50摄氏度才能有效,对37摄氏度下NgAgo内切酶的活性表示质疑。
在长文中,Gaetan Burgio表示,“《自然生物技术》期刊应该要求韩春雨公开所有的原始数据和实验条件”,并认为:“NgAgo的未来并不明朗。”
Gaetan Burgio选择了小鼠受精卵进行重复实验。因为他长期研究小鼠细胞,较为熟悉,并在两年半前,用小鼠细胞,完成了他的首次CRISPR-Cas9基因编辑。由于韩春雨的论文中使用的是人体细胞,严格意义上来说,Gaetan Burgio和韩春雨所做的不是同一个实验。但由于小鼠和人体结构相似,一般认为人体细胞能完成的实验也能在小鼠细胞上进行。
在Gaetan Burgio发文后不久,来自西班牙高等科学委员会(CSIC)下设的国立生物技术中心(Centro Nacional de Biotecnologia)的科学家Lluis Montoliu转发了该文,并在Twitter上写道:“CRISPR万岁!!!CRISPR-Cas9系统会用上数百亿万年而不衰。难以击垮。”
据公开资料显示,2015年,Lluis Montoliu从非营利组织“国际转基因技术协会”(The International Society for Transgenic Technologies)卸任主席之位。他的Twitter简介显示,Lluis Montoliu的研究方向是哺乳动物的基因组,以及基于转基因动物研究人类的罕见疾病。