新选组局长近藤勇

新选组队士们搏命挥舞着闪着冷光的白刃，数名尊攘志士不敌，从2楼跃下欲逃走，随即遭埋伏在后院的新选组队士阻击，由于尊攘派人多且拼命，负责堵截的新选组队士奥泽荣助当场战死，安藤早太郎与新田革左门卫身受重伤，数日后身亡。近藤勇见状，率队追击至后院，帮队士收拾残局，而冲田总司则独自在二楼迎战数倍于己的浪士。据说当时多名浪士看见冲田挥刀的模样，竟吓得头也不回地逃出池田屋。还有种说法认为冲田总司在池田屋激战之际，因肺病发作而咯血，但浪士也是被其高超的剑术所震慑，仍然夺门而逃，若此说成立，可视为冲田总司最早的发病记录。永仓新八与藤堂平助分别负责肃清一楼土间与中庭的浪士，激战中藤堂额头被砍伤，幸亏永仓救援才侥幸生还。此时，土方岁三率援军赶到，负责在门口堵截逃跑浪士的谷三十郎与武田观柳斋也随即加入战斗，在战斗接近尾声之际，一名土佐浪人从破裂的天花板上坠下，武田瞬间挥刀斩杀了对方。

这次事件轰动了整个日本，史称“池田屋事件”。这场血战中，新选组近藤勇队的10人中有3人丧命，而尊攘派一方则死伤惨重，颇具威望的吉田磨念，土佐勤王党的骨干望月龟弥太以及宫部鼎藏、北添佶磨等7名尊攘志士皆死于新选组的白刃之下，另有11名尊攘志士受伤被捕。后来位列明治维新三杰之一的长州藩尊攘派巨头桂小五郎（木户孝允）因迟到侥幸逃过一劫。经此一役，尊攘派首领或死或伤，元气大损。后世将池田屋事件评为“间接导致明治维新往后推迟1年的原因”。而新选组则一战成名天下知，连啼哭的孩子听见“新选组”三个字，都会立刻噤声。新选组最初的理念是“尊皇敬幕攘夷”，但池田屋事件标志着他们彻底成为以“佐幕”为政治立场的组织，说是幕府的爪牙亦不为过。